【設(shè)備更新系列】等溫滴定量熱儀（ITC）篇

更新時(shí)間：2024-08-14 點(diǎn)擊次數(shù)：468

大規(guī)模設(shè)備更新的方案正在穩(wěn)步推行中，您的實(shí)驗(yàn)室是否考慮新增或更新一臺(tái)分子互作分析儀器？

被數(shù)萬(wàn)篇科學(xué)論文的引用的等溫滴定微量熱儀，被業(yè)內(nèi)認(rèn)為分子間相互作用分析的金標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，可以用來(lái)交叉驗(yàn)證多種基于表面的生物長(zhǎng)安其互作技術(shù)和熒光互作技術(shù)。這里為您簡(jiǎn)單介紹一下ITC的主要應(yīng)用，供您參考。

等溫滴定量熱儀（ITC）通過(guò)非標(biāo)記的、直接測(cè)定分子間相互作用過(guò)程中因非共價(jià)鍵重組所吸收和釋放的能量，在一次實(shí)驗(yàn)中即可直接測(cè)定全套熱力學(xué)參數(shù)，如親和力、結(jié)合特異性、化學(xué)計(jì)量比、焓變、熵變以及吉布斯自由能變化等信息，為研究各類(lèi)生物分子間相互作用提供全面而深入的視角。

等溫滴定量熱儀無(wú)需對(duì)樣品進(jìn)行任何標(biāo)記、無(wú)需芯片固定和修飾，也無(wú)需再生步驟，無(wú)分子量大小和樣品種類(lèi)限制、是真正的無(wú)標(biāo)記的溶液內(nèi)互作技術(shù)，被業(yè)內(nèi)認(rèn)為分子間相互作用分析的金標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，可以用來(lái)交叉驗(yàn)證多種基于表面的生物傳感器互作技術(shù)和熒光互作技術(shù)。數(shù)萬(wàn)篇科學(xué)論文的引用，是您與數(shù)萬(wàn)用戶共同的選擇。選擇MicroCal ITC系列產(chǎn)品，顯著提高研究數(shù)據(jù)的可靠性，并確保文獻(xiàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重現(xiàn)性。

PEAQ ITC (左），PEAQ-ITC Automated（右）

典型應(yīng)用

藥物設(shè)計(jì)-先導(dǎo)化合物優(yōu)化

結(jié)合虛擬分子模擬和晶體結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)，ITC技術(shù)可以幫助開(kāi)發(fā)者設(shè)計(jì)和優(yōu)化出既具有較高特異性(焓變貢獻(xiàn)為主)、且具有較好的透膜性 (熵變貢獻(xiàn)為主) 的藥物分子 (熵焓平衡設(shè)計(jì)) 。

圖1：HIV-蛋白酶抑制劑的研發(fā)過(guò)程

圖2：第二代他汀類(lèi)藥物（Statins）

篩選和交互驗(yàn)證結(jié)合特異性

表觀遺傳學(xué)中的組蛋白marker研究，通過(guò)ITC實(shí)驗(yàn)，用具有不同甲基化修飾以及序列的組蛋白肽段marker (下圖中由左向右依次為: H3K4me3, H3C4me3和H3G4）滴定蛋白TAF3 PHD結(jié)構(gòu)域，從而確認(rèn)特異性結(jié)合的組蛋白marker。

圖3：由左向右依次為: H3K4me3, H3C4me3和H3G4

酶學(xué)動(dòng)力學(xué)研究

Microcal ITC可以在無(wú)需對(duì)底物或產(chǎn)品進(jìn)行任何修飾的情況下完成酶促動(dòng)力學(xué)的研究，獲取Km, kcat和Ki等數(shù)據(jù)。采用ITC和分光光度計(jì)進(jìn)行酶促動(dòng)力學(xué)(PNPP-PP1-γ)的研究的對(duì)比。使用兩種不同技術(shù)獲得的酶促動(dòng)力學(xué)速率參數(shù)吻合非常好。

圖4：不同技術(shù)獲得的酶促動(dòng)力學(xué)速率參數(shù)吻合

全自動(dòng)的Microcal PEAQ-ITC Automated將Microcal PEAQ-ITC的性能與全自動(dòng)化運(yùn)行相結(jié)合，實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化與智能化運(yùn)作。相比手動(dòng)版，自動(dòng)版將分析效率提升7倍。全自動(dòng)化實(shí)現(xiàn)加樣，清洗，樣品轉(zhuǎn)移，減少人員操作誤差，減少新手培訓(xùn)和指導(dǎo)時(shí)間，提升數(shù)據(jù)質(zhì)量和儀器使用效率。

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