【熱點(diǎn)應(yīng)用】使用NanoSight Pro掌握細(xì)胞外囊泡熒光標(biāo)記和分析白皮書

細(xì)胞外囊泡（EVs）因其不斷發(fā)展的應(yīng)用和突破而引起了人們越來越大的探索興趣，特別是在疾病診斷和治療潛力領(lǐng)域。這些由活生物體內(nèi)的細(xì)胞產(chǎn)生的物質(zhì)最初被認(rèn)為是細(xì)胞廢物。然而，研究揭示了它們在細(xì)胞通訊中的關(guān)鍵作用。例如EVs的組成，可以反映其來源細(xì)胞的生理或病理狀態(tài)，使之成為一些列疾病的生物標(biāo)志物，從癌癥到神經(jīng)退行性疾病和炎癥性疾病。

準(zhǔn)確表征EVs制劑的大小、異質(zhì)性和濃度可分析、了解生物功能和診斷提供重要信息。但從體液中提取的細(xì)胞外囊泡伴隨著非EVs成分，形成了相當(dāng)多樣化的異質(zhì)的系統(tǒng)，這對分析表征提出了重大挑戰(zhàn)。

由于EVs的復(fù)雜性，通常采用多種技術(shù)方法來全面表征EVs，包括流式細(xì)胞術(shù)、蛋白質(zhì)印跡、酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）、質(zhì)譜蛋白質(zhì)組學(xué)、基于顯微鏡的方法和納米顆粒跟蹤分析（NTA）。

NTA已成為快速表征細(xì)胞外囊泡高分辨率大小和濃度的常用技術(shù)。

NTA光學(xué)裝置示意圖

在本文涉及的研究報告中，使用來自尿液的EVs，通過光散射和熒光分析評估其大小分布和濃度。采用多種熒光染料和熒光基團(tuán)，通過直接標(biāo)記抗體進(jìn)行生物標(biāo)志物檢測，使用NanoSight Pro對樣品進(jìn)行納米顆粒跟蹤分析，對每次熒光測量應(yīng)用適當(dāng)?shù)募す獠ㄩL和熒光長通濾光片，在NS Xplorer軟件的專屬熒光模式下，可在單次測量中對光散射和熒光進(jìn)行組合分析，不僅報告尺寸分布，還直接報告濃度和熒光效率。

本白皮書闡述了如何使用NanoSight Pro探索各種標(biāo)記方法，遵循染料特性（例如光穩(wěn)定性和亮度）、樣品制備方法（例如抗體親和力和特異性、孵育條件）和測量條件（例如樣品呈現(xiàn)、儀器設(shè)置、測量時間）等一些簡單的規(guī)則，來實(shí)現(xiàn)熒光NTA檢測EVs亞群，從而揭示細(xì)胞外囊泡EVs的不同特性。